适用于中国人群mtDNA全序列扩增的PCR引物位置示意图
F代表正向引物,R代表反向引物
这里选用的26对PCR引物覆盖了线粒体基因组全长,其中15-1、15-2、15-3、
24-1、24-2对引物为针对中国人群重新设计,扩增片段最小的是第24-1对引物,
420bp;扩增片段最大的位点是第22对引物,1162bp;所有PCR片段大小适中,均
适宜PCR扩增。
(二】PCR扩增
PCR反应体系总体积20vl,含1×反应缓冲液,1.Smmol/LMgCIz,0.5UTaq
酶,0. 25pmol/L引物,200pmol/L dNTP,DNA20~200ng。目前各种方法提取的
DNA模板,均适合线粒体碱基序列的扩增。PCR扩增参数见表7-9。PCR扩增完
成后进行产物纯化。