3.洗膜杂交后的固相膜经过漂洗,去除杂交膜上未与靶DNA杂交的多余探针,降低杂交背景信号。多基因座探针和单基因座探针的杂交条件不同,控制杂交条件的关键在于漂洗。多基因座探针多采用低强度杂交的洗膜条件,常用5×SSC洗膜液,温度55℃;单基因座探针多采用高强度杂交的洗膜条件,常用0.1×SSC,温度65℃。
(八)谱带显示
酶标记物的显示是通过酶反应耦联化学发光的技术,酶反应的发光底物被氧化剂及标记酶催化,氧化成激发分子状态,在跃迁回上海亲子鉴定基态时释放出光子,能够使X光片感光。在反应体系中加入发光增强剂,可使光子的强度放大近1000倍。
辣根过氧化酶反应底物是氨基苯二酰肼(鲁米诺)及其衍生物,反应体系中使用的氧化剂足过氧化氢或过硼酸钠,增强剂为6一羟基苯噻唑。碱性磷酸酶的化学发光底物为disodium-3-( 4-methoxyspiro[l,2-dioxetane-3,2’一(5’-chloro) tricyclo-decan]-4-yl) phenyl phophate(CSPD)。碱性磷酸酶使CSPD脱磷形成不稳定的中间产物,并迅速分解,同时发出477nm光子,
上海亲子鉴定感光X胶片。经过显、定影,得到杂交DNA图谱。