、焦磷酸测序技术

    焦磷酸测序技术( pyrosequencing)是一种基于发光法测定焦磷酸盐(PPi)的

测序技术。它不需用电泳，适合短片段DNA序列分析。

    （一）基本原理

    引物与模板DNA退火后，在DNA聚合酶(polymerase)、三磷酸腺苷硫酸化

酶(ATP sulfurylase)、荧光素酶(luciferase)和三磷酸腺苷双磷酸酶(apyrase)的协

同作用下完成循环测序反应。当加入的dNTP与模板互补时，DNA模板与互补

的dNTP聚合同时产生等摩尔PPi(图6-20)，在三磷酸腺苷硫酸化酶的催化下，

PPi与5’磷酸化硫酸腺苷(APS)反应生成等量的ATP;在荧光素酶催化作用下，

ATP与虫荧光素(luciferin)反应发光（图6-21），最大波长约为560nm，可用光电倍

增管或电荷耦合装置检测。产生的荧光信号强度与聚合的dNTP个数成正比，根

据加人的dNTP类型和荧光信号强度就可实时记录模板DNA的核苷酸序列