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遗传标记在法医学应用中的研究进展

Alu插入多态性遗传标记在法医学应用中的研究进展)基于Alu元件的DNA定量技术各种现场检材提取的DNA,在遗传标记分析前常需进行定量,以确定合适的上海亲子鉴定检验策略常用的紫外分光光度法,荧光或化学染料法等对检材需要量大,而且没有种属特异性,不能用:于Chelex法提取的单链DNAo ALIU元件有种属特异或引物对现场上海亲子鉴检材提取的DNA进行评估,可以实现对其中上海亲子鉴定人源DNA的高灵敏基于Alu元件的DNA定量方法有杂交法和PCR法两大类。杂交法以Pro-mega公司的AluQuant 人类DNA定量分析系统为代表。与一般狭缝(slot blot)杂交不同,AluQuant系统为液相杂交,相对简单省时,定量的线性范围为0.5~50ng。作为商品化的DNA定量试剂盒,AluQuant系统在PCR定量法普及以前,在法医DNA分析实验室曾经广为采用。基于Alu-PCR的DNA定量方法较多,有灵长类特异、人特异,以及性别特异等多种,各种方法的特异性主要取决于引物的设计。灵长类特异的PCR方案以整个Alu家族为靶标,覆盖范围广,灵敏度高,但不能区分人和非人的长类动物。人特异的PCR方案以进化上出现较晚的、人类特异的Alu-Y亚族为靶标,可以排除其他灵长类动物DNA的干扰。性别特异的PCR方案以x 染色体上固定的Alu插入序列(AluSTXa和AluSTYa)为靶标,可以分别对混合斑中的男性和女性DNA进行定量估计,在性犯罪案件的DNA分析中有重要'合斑中的男在性犯罪案件的DNA分析中有重要意义。从技术角度看,基于Alu-PCR的DNA定量技术有inter-Alu PCR和intra-Alu PCR两大类,两者均可以采用荧光染料终点法或实时定量PCR法(Walker et al. , 2003a)。 后者操作方便、精确度高、客观性强,随着实时定量PCR设备和技术的普及,逐渐占据主要地位。Alu定量法的主要缺点是不能对样品中的线粒体DNA进行精确估计。由于不同细胞的线粒体拷贝数可能差异很大,核DNA与线粒体DNA的比例不定,对需要进行线粒体DNA分析的样品,需葵其,他方法的补充。

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